實(shí)驗(yàn)室酶標(biāo)儀專題解說
目錄：
五、酶標(biāo)儀波長(zhǎng)應(yīng)用分析
酶標(biāo)儀是一個(gè)很神奇的儀器，任何病毒或者是添加劑都無法逃出它的檢測(cè)，下面我們將為您詳細(xì)介紹酶標(biāo)儀及酶標(biāo)儀的使用問題。
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器，可簡(jiǎn)單的分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類，酶標(biāo)儀不僅應(yīng)在醫(yī)療行業(yè)用于酶聯(lián)免疫學(xué)的檢測(cè)工作，而且在食品衛(wèi)生，農(nóng)業(yè)，畜牧等產(chǎn)業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。
1.酶標(biāo)儀在醫(yī)療行業(yè)的檢測(cè)項(xiàng)目
過敏原，皮膚不耐受等
甲狀腺：促甲狀腺激素，T3T4等
糖尿?。?/span>C肽，胰島素，胰島素抗體，胰島素原等
優(yōu)生優(yōu)育：弓形蟲抗體，巨細(xì)胞病毒，風(fēng)疹病毒等
不孕癥：性激素六項(xiàng)，泌乳素，雌三醇，生長(zhǎng)素，抗精子抗體等
傳染病類：例如肝炎，艾滋病，衣原體，肺炎支原體，梅毒，水痘等
腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原，甲胎蛋白，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，胃腸癌等
2.酶標(biāo)儀在食品衛(wèi)生，農(nóng)業(yè)以及畜牧行業(yè)的檢測(cè)項(xiàng)目
1.營(yíng)養(yǎng)成分
2.添加劑
3.農(nóng)藥殘留量
4.菌毒素
5.無機(jī)毒素
6.抗生素激素殘留
7.致癌物質(zhì)殘留
8.有毒有害物質(zhì)污染等
另外酶標(biāo)儀還可檢測(cè)曾使人們深受其害的瘦肉精，檢測(cè)結(jié)果很[accuracy]。
1.光吸收酶標(biāo)儀：是用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測(cè)，特定波長(zhǎng)的光通過微孔板中的樣品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系，由此可以用來定性和定量的檢測(cè)，光吸收的檢測(cè)技術(shù)成熟，成本低，操作簡(jiǎn)單，但是動(dòng)態(tài)范圍窄，靈敏度比較低，特異性不強(qiáng)，一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源，而紫外/可見酶標(biāo)儀是可以將兩種光源進(jìn)行切換，適應(yīng)不同測(cè)量波長(zhǎng)的需求。
2.熒光酶標(biāo)儀：是用來進(jìn)行熒光的檢測(cè)，通過激發(fā)光柵分光后的特定波長(zhǎng)的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后,會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)更長(zhǎng)的發(fā)射光，通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測(cè)器，熒光的強(qiáng)度與樣品的濃度呈一定的比例，熒光檢測(cè)靈敏度高，可實(shí)時(shí)檢測(cè)，使用方便，檢測(cè)模式多樣，但是容易受外界干擾，激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響，干擾檢測(cè)。
3.化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀：是來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光，可分為輝光型和閃光型兩種類型，輝光型發(fā)光持久，穩(wěn)定，能持續(xù)一段時(shí)間；閃光型發(fā)光時(shí)間短,變化快，穩(wěn)定性不強(qiáng)，需要應(yīng)用自動(dòng)加樣器才可以進(jìn)行，化學(xué)發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系，化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀靈敏度非常高,動(dòng)力學(xué)范圍廣，
4.多功能酶標(biāo)儀：是以上三種酶標(biāo)儀的集合，它集成了兩種或者三種酶標(biāo)儀于一體，可以同時(shí)進(jìn)行光吸收，熒光和化學(xué)發(fā)光的檢測(cè)，功能強(qiáng)大，使用范圍廣，可作為研究平臺(tái)，避免了重復(fù)購買，是實(shí)驗(yàn)室的值得擁有，另外根據(jù)通道的個(gè)數(shù)，可以將酶標(biāo)儀分為單通道和多通道兩種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)兩種之分。
酶標(biāo)儀實(shí)際上是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)。電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，[much]后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。 微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過程。
五、酶標(biāo)儀波長(zhǎng)應(yīng)用分析
1.酶標(biāo)儀在用單波長(zhǎng)測(cè)定吸光度時(shí)，除受到測(cè)定內(nèi)源性干擾( 包括噪音、漂移、電壓等) 因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測(cè)過程中，由于液面表面張力的作用，液體的表面不是一個(gè)平面，而是形成一個(gè)凹面，從側(cè)面看似凹透鏡，這樣不可避免會(huì)影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液面時(shí)，除正常的被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射( 如光線通過凹透鏡那樣) ，影響吸光度的檢測(cè)。而酶標(biāo)儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點(diǎn)光源，如果每次能在同一部位檢測(cè)，吸光度的重復(fù)性將得到保證，但由于機(jī)械運(yùn)動(dòng)等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部分被檢測(cè)，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
2.在雙波長(zhǎng)測(cè)定中，減少了測(cè)定干擾和電路干擾，因此測(cè)定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn)。由于液體表面張力的不同，導(dǎo)致單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)誤差較大。并且用不同的洗滌劑會(huì)影響到[much]后加入底物和終止液后的液面情況，用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后，形成的液面更凹，對(duì)單波長(zhǎng)檢測(cè)的影響更大，并且與表面活性劑的濃度成正比。而用中性蒸餾水洗滌后，單、雙波長(zhǎng)檢測(cè)技術(shù)結(jié)果基本一致。
1.酶標(biāo)儀應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
2.為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。
3.操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間，環(huán)境濕度在15%-85%之間。
4.操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
5.操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。
6.保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，以及足夠的操作空間。
1.開啟儀器電源開關(guān)，預(yù)熱5分鐘，同時(shí)啟動(dòng)電腦。
2.啟動(dòng)Magellan.exe程序，加入程序主界面，儀器微孔板架同時(shí)自動(dòng)打開。
3.將待測(cè)微孔板在板架上放好。
4.根據(jù)不同的測(cè)量要求，設(shè)置好測(cè)定波長(zhǎng)和測(cè)量模式后，進(jìn)行檢測(cè)。
5.保存檢測(cè)結(jié)果或進(jìn)行打印。
6.關(guān)閉計(jì)算機(jī)和主機(jī)電源，登記使用記錄。
1.洗板應(yīng)清洗干凈，如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。
2.如使用的樣品或試劑具有污染性，毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明，以防對(duì)操作人員造成損害。
3.如儀器接觸過污染性或傳染性物品，記得進(jìn)行清洗和消毒。
4.請(qǐng)勿將樣品或試劑酒到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。
5.使用加液器，加液頭不能混用。
6.在測(cè)量過程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。切記不要再測(cè)量過程中關(guān)閉電源。
7.對(duì)于因試劑盒問題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改，以達(dá)到理想中效果。
8.使用完后記得蓋好防塵罩。
1.開機(jī)后無反應(yīng)：電源未接通（應(yīng)檢查電源線是否接好，保險(xiǎn)絲是否燒斷）。
2.儀器無法與計(jì)算機(jī)通訊：連線不通。（首先檢查計(jì)算機(jī)與儀器接口是否正確，它應(yīng)與儀器后部右側(cè)標(biāo)有RS-232接口相連。因?yàn)榇蛴C(jī)接口在其左下方可互插入，會(huì)造成接口錯(cuò)誤發(fā)生。連線不通的另一種原因是連線本身的問題。另外還應(yīng)檢查計(jì)算機(jī)設(shè)置的串口是否與儀器相連。
3.儀器顯示“濾光片錯(cuò)誤”：儀器自檢過程中沒有接收到濾光片輪位置信號(hào)。應(yīng)首先檢查濾光片輪是否正確放在濾光片輪的插槽內(nèi)。注意濾光片輪在自檢過程中是否轉(zhuǎn)動(dòng)。如不轉(zhuǎn)動(dòng)，應(yīng)拆下儀器左右側(cè)各一固定螺絲，將機(jī)蓋掀起，檢查濾光片輪驅(qū)動(dòng)電機(jī)的連線是否插緊在電機(jī)控制電路板上（PCBMOTCU-03）。如果該輪連續(xù)轉(zhuǎn)不停止，則是檢測(cè)濾光片輪位置的槽形光耦損壞。在自檢過程中，濾光片輪正常轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)應(yīng)能聽到其轉(zhuǎn)動(dòng)的聲音。轉(zhuǎn)動(dòng)聲音是有間斷的，其間斷次數(shù)與裝有濾光片的個(gè)數(shù)相同。
4.打印機(jī)不打印：連接問題（檢查打印機(jī)與儀器的接口是否正確。檢查打印機(jī)的連線是否有問題，可用替換法試驗(yàn)確定。有時(shí)是儀器與打印機(jī)接口電路板損壞，這時(shí)儀器往往顯示“缺紙”或“打印機(jī)故障”。）
5.關(guān)機(jī)后儀器存儲(chǔ)的日期和時(shí)間丟失：主電路板上的一鈕扣電池電壓過低所致（檢查：正常電池電壓為3VDC，如果低于2.6VDC便會(huì)出現(xiàn)上述問題）。
檢測(cè)技術(shù)：熒光強(qiáng)度、時(shí)間分辨熒光、熒光偏振、瞬時(shí)與連續(xù)發(fā)光、紫外-可見光吸收、FRET、TR-FRET、BRET、面積掃描、光譜掃描。
少見的光學(xué)系統(tǒng)：窄帶單色器、優(yōu)化濾光片/二色鏡組合，再加上三個(gè)廣譜光源，令儀器在所有讀板模式下都能具有超卓的性能。
兼容Take3微量檢測(cè)板：兼容16道體積為2 µL的微量樣品的檢測(cè)，可進(jìn)行低體積DNA/RNA 260nm檢測(cè)，節(jié)省寶貴試劑，快速簡(jiǎn)單。
高敏感度：針對(duì)各種特定形態(tài)的專用光學(xué)元件令儀器小巧緊湊，可適用于更多檢測(cè)場(chǎng)合。
模塊化設(shè)計(jì)：可以僅購買所需功能。隨著實(shí)驗(yàn)需求增加可輕松升級(jí)儀器。
高通量：針對(duì)篩選分析的[much]優(yōu)化選擇，包括 1536 孔讀板模式。
酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和[accuracy]度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在0-2.5之間即可滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。
如Multiskan Ascent的吸光度測(cè)定范圍(Abs)達(dá)0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0 Abs范圍內(nèi)，測(cè)定精密度CV小于士0.2%。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
1.盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板，微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，故用它作為固相載體，
2.由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光來都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液。
3.酶標(biāo)儀通常不僅用A，有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度，酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分，自動(dòng)型的儀器。
1.酶標(biāo)儀的操作應(yīng)較簡(jiǎn)單，菜單應(yīng)用中文顯示。
2.儀器體積不宜過大，由于實(shí)驗(yàn)室空間有限，因此小巧玲瓏、外形美觀的機(jī)型頗受用戶的青睞。
3.由于酶標(biāo)儀在使用過程中，經(jīng)常會(huì)有樣品液體外濺，所以酶標(biāo)儀外殼要易于消毒、清潔。
4.對(duì)比色和打印的要求。一臺(tái)好的酶標(biāo)儀應(yīng)能夠快速進(jìn)行比色和打印，可為檢測(cè)人員節(jié)省大量的時(shí)間，并可確保檢驗(yàn)結(jié)果的[accuracy]性。
5.廠商可配置易損部件。酶標(biāo)儀在臨床上使用頻率較高，一些部件的損壞率也較高，如放酶標(biāo)儀的卡夾、滑槽等。廠商能及時(shí)地配置易置易損部件，對(duì)保證酶標(biāo)儀正常運(yùn)行和延長(zhǎng)期壽命是非常重要的。
